免疫荧光实验技术服务

 免疫荧光实验技术服务

 

一、荧光免疫测定技术

 将试剂抗原或试剂抗体用荧光素进行标记,试剂与标本中相应的抗体或抗原反应后,测定复合物中的荧光素,这种免疫技术,称为免疫荧光素技术。

 

二、常见荧光素 

 ⑴FITC;⑵RB200;⑶TRITC;⑷镧系:Eu、Tb;⑸PE;⑹其它。

 

三、实验仪器与试剂

1、实验仪器:染色缸5个,玻片架1个,微波炉,湿盒,37℃恒温箱,锡箔纸

2、实验试剂:二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ、无水酒精、30%双氧水、柠檬酸盐缓冲液(粉末,制备时候用双蒸水定容,调PH)、PBS、BSA(粉末,用PBS溶解)、一抗(可用BSA溶解)、二抗(可用BSA溶解)、甘油、丙酮、多聚甲醛、Triton X-100(用PBS制备)


四、实验步骤

石蜡包埋切片处理方法:

1.二甲苯Ⅰ浸泡20分钟

2.二甲苯Ⅱ浸泡20分钟

3.梯度酒精(100、95、75)%脱水各5分钟

4.双蒸水冲洗浸泡1次,5分钟

5.3%双氧水浸泡,室温5-10min,或37℃10min

6.抗原修复:切片浸入0.01M柠檬酸盐缓冲液(PH6.0),微波炉加热至沸腾后断电。自然冷却至室温。

7.PBS冲洗2次,每次3分钟

8.滴加5%BSA封闭液,室温20min

9.甩去多余液体不洗

10.滴加适当稀释的一抗,超过组织边缘2mm,置于湿盒内4℃过夜或者37℃1小时或20℃2小时

11.取湿盒于37℃温箱复温,30min

12.滴加二抗,37℃温箱孵育1小时(避光操作和存放)

13.PBS冲洗3次,每次2分钟

14.甘油封片,甘油:水=1:1或甘油:PBS=9:1

15.4℃保存,最好及时激光共聚焦拍照

 

冰冻切片处理方法:

1.冰丙酮浸泡30s,自然晾干

2.滴加5%BSA封闭液,室温20min

3.甩去多余液体不洗

4.滴加适当稀释的一抗,超过组织边缘2mm,置于湿盒内4℃过夜或者37℃1小时或20℃2小时

5.取湿盒于37℃温箱复温,30min

6.滴加二抗,37℃温箱孵育1小时(避光操作和存放)

7.PBS冲洗3次,每次2分钟

8.甘油封片,甘油:水=1:1或甘油:PBS=9:1

9.4℃保存,最好及时激光共聚焦拍照


服务流程




威斯腾生物服务项目


分子生物学检测蛋白质与免疫学动物实验
实时荧光定量PCR单克隆抗体制备帕金森疾病模型
免疫共沉淀(Co-IP)多克隆抗体制备抑郁症动物模型
ELISA(酶联免疫吸附法)技术Western-blot 实验服务脊髓损伤模型
生化指标检测蛋白双向电泳实验服务脑外损伤模型
双荧光素酶报告基因检测原核蛋白表达纯化骨神经损伤模型
染色质免疫共沉淀(ChIP)真核蛋白表达纯化心肌缺血模型
GST pull DownITRAQ定量蛋白质组学心力衰竭模型
SLAC蛋白组学肺动脉高血压动物模型
高血压模型
病毒包装纯化实验课题整体外包粥样动脉硬化模型
过表达/干扰慢病毒包装纯化整体课题外包大脑中动脉阻塞模型
过表达/干扰腺病毒包装纯化细胞整体实验外包慢性之气管炎模型
逆转录病毒包装纯化动物整体实验外包过敏性哮喘模型
腺相关病毒包装纯化肺炎大鼠模型
肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片原代细胞培养肝纤维化模型
细胞因子芯片骨髓间充质干细胞培养胆结石模型
生长因子芯片脂肪干细胞培养急性胰腺炎模型
信号通路磷酸化水平检测芯片心肌成纤维细胞培养急性肾衰竭模型
BioPlex悬浮芯片软骨细胞培养体内血栓模型
生长因子芯片血管内皮细胞培养关节炎模型
炎症因子芯片神经元细胞培养I型和II型糖尿病模型
血管生成因子芯片内皮组细胞原代培养裸鼠成瘤
凋亡因子芯片基因编辑动物
趋化因子芯片电生理相关服务动物整体实验服务
HuProt TM 20K人类蛋白组芯片膜片钳实验
细胞生物学高通量测序代谢组学
细胞原代培养mRNA测序气相色谱GC/MS
MTT检测LncRNA测序液相色谱LC/MS
细胞凋亡检测全基因组测序核磁共震NMR
细胞周期检测RNA-Seq测序
细胞克隆形成实验外显子测序影像学相关实验
Transwell细胞迁移/侵袭16s扩增子测序Micro-CT
流式分选Small RNA测序小动物活体成像
CCK8/XTT检测宏基因组测序核磁共振
台盼蓝检测细胞活性单细胞测序PET-CT
药物筛选细胞学实验circleRNA测序
细胞粘附性检测甲基化测序基因编辑动物
细胞划痕实验条件性敲除小鼠/大鼠
细胞生物学整体实验全基因敲除小鼠/大鼠
细胞成管实验
病理学检测CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入基因芯片
扫描电镜基因定点突变细胞系LncRNA芯片
透射电镜单基因敲除细胞系miRNA芯片
HE染色多基因敲除细胞系mRNA芯片
免疫组化目的基因敲入细胞系甲基化芯片(限人和小鼠来源样本)
Tunel(原位末端凋亡法)检测报告基因敲入细胞系SNP芯片(限人和小鼠来源样本)
激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除细胞系
免疫荧光
Masson染色CRISPR/Cas9动物敲除/敲入科研方案设计与SCI相关服务
原位杂交基因敲除大鼠/小鼠科研文献论著翻译
荧光原位杂交基因敲入大鼠/小鼠SCI论文翻译润色服务
特殊染色(PSA、茜素红、阿尔新蓝等)临床实验/科研实验设计方案指导
行为学检测药物筛选服务项目药效学评价
水迷宫实验高通量自动药物筛选平台神经系统药物药效学评价
旷场实验细胞高内涵药物筛选平台抗肿瘤药物药效学评价
重复性刻板行为检测蛋白质组学靶标研发平台心血管系统药物药效学评价
动物跑台检测分子药理研究平台泌尿系统药物药效学评价
强迫游泳生物膜片钳药物筛选平台内分泌系统药物药效学评价
常规药物体外筛选抗炎免疫药物药效学评价


【本平台合作项目】

分子生物学、细胞生物学、病理染色检测、细胞敲除&敲入、模式与转基因动物、SPF动物保种、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!

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