免疫荧光实验技术服务

 免疫荧光实验技术服务

 

一、荧光免疫测定技术

 将试剂抗原或试剂抗体用荧光素进行标记,试剂与标本中相应的抗体或抗原反应后,测定复合物中的荧光素,这种免疫技术,称为免疫荧光素技术。

 

二、常见荧光素 

 ⑴FITC;⑵RB200;⑶TRITC;⑷镧系:Eu、Tb;⑸PE;⑹其它。

 

三、实验仪器与试剂

1、实验仪器:染色缸5个,玻片架1个,微波炉,湿盒,37℃恒温箱,锡箔纸

2、实验试剂:二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ、无水酒精、30%双氧水、柠檬酸盐缓冲液(粉末,制备时候用双蒸水定容,调PH)、PBS、BSA(粉末,用PBS溶解)、一抗(可用BSA溶解)、二抗(可用BSA溶解)、甘油、丙酮、多聚甲醛、Triton X-100(用PBS制备)


四、实验步骤

石蜡包埋切片处理方法:

1.二甲苯Ⅰ浸泡20分钟

2.二甲苯Ⅱ浸泡20分钟

3.梯度酒精(100、95、75)%脱水各5分钟

4.双蒸水冲洗浸泡1次,5分钟

5.3%双氧水浸泡,室温5-10min,或37℃10min

6.抗原修复:切片浸入0.01M柠檬酸盐缓冲液(PH6.0),微波炉加热至沸腾后断电。自然冷却至室温。

7.PBS冲洗2次,每次3分钟

8.滴加5%BSA封闭液,室温20min

9.甩去多余液体不洗

10.滴加适当稀释的一抗,超过组织边缘2mm,置于湿盒内4℃过夜或者37℃1小时或20℃2小时

11.取湿盒于37℃温箱复温,30min

12.滴加二抗,37℃温箱孵育1小时(避光操作和存放)

13.PBS冲洗3次,每次2分钟

14.甘油封片,甘油:水=1:1或甘油:PBS=9:1

15.4℃保存,最好及时激光共聚焦拍照

 

冰冻切片处理方法:

1.冰丙酮浸泡30s,自然晾干

2.滴加5%BSA封闭液,室温20min

3.甩去多余液体不洗

4.滴加适当稀释的一抗,超过组织边缘2mm,置于湿盒内4℃过夜或者37℃1小时或20℃2小时

5.取湿盒于37℃温箱复温,30min

6.滴加二抗,37℃温箱孵育1小时(避光操作和存放)

7.PBS冲洗3次,每次2分钟

8.甘油封片,甘油:水=1:1或甘油:PBS=9:1

9.4℃保存,最好及时激光共聚焦拍照


五、服务流程



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