大鼠脂肪间充质干细胞原代培养

大鼠脂肪间充质干细胞原代培养

一、实验动物:大鼠,北京华阜康生物科技股份有限公司。

二、主要仪器

80/150/200目不锈钢细胞筛

上海生工,中国

电热压力蒸汽消毒器

浙江绍兴医疗器械总厂

超净工作台

苏州净化设备公司

二氧化碳培养箱

三洋(Sanyo),日本

电热恒温鼓风干燥箱

上海跃进医疗器械厂

低速台式离心机

上海安亭科学仪器厂

倒置显微镜    

OLYMPUS,日本

照像系统

OLYMPUS,日本

移液器

Eppendorf,德国

细胞计数板

上海医用仪器厂

细胞培养瓶及细胞培养板

Costar,美国

各种型号塑料离心管、移液枪头和冻存管           

Axygen,美国

0.22um纤维素滤膜       

MILLIPORE,美国

0.45um混合纤维素滤膜      

MILLIPORE,美国

剪刀、镊子

中山恒基达医疗器械

3、主要试剂配制

(1)PBS磷酸盐缓冲液: PBS粉剂每袋加ddH2O定容至1000mL,调pH7.2,121℃,30min高压灭菌,4℃冰箱保存。

(2)DMEM细胞生长培养液:临用前根据需要按体积比10%加胎牛血清,最后按1%体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素),使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U/mL和100 U/mL,再加入5ng/mL的SCF,置于4℃冰箱保存。

(3)细胞冻存液:生长培养基(含20%胎牛血清)或100%胎牛血清,加入10%的DMSO混合均匀,置于4℃冰箱保存。

 三、实验步骤

1. 取大鼠,使用7%水合氯醛(0.5ml/100g)麻醉,在无菌条件下迅速取出脂肪组织。

2. 用含1%青链双抗的D-Hank’s 液冲洗3次。剥离脂肪组织上的血管。
3. 将脂肪组织剪碎,直到组织变为液体状,加入8-10mL 胰酶,37℃消化90min。
4. 消化完成后,加入等量含血清DMEM 培养基终止消化,过200目筛网去除大块组织
5. 以1500r/min 离心5min,去上清液,加入含血清DMEM 培养基重悬细胞。

6. 接种至6 孔板,放入细胞培养箱(37℃,CO2 浓度5%)。细胞稳定培养24h后换液,冲去未贴壁的细胞,更换DMEM培养基(成分同上)继续培养。以后每2天换液1 次,注意观察培养基有无浑浊、颜色变淡、漂浮物和絮状物等

四、细胞形态

大鼠脂肪间充质干细胞培养过程中,约24h即可贴壁生长,细胞呈长梭形生长速度较慢。换液后细胞增殖明显,出现以长梭形为主的形态,5- 7d  70%-80%可融合达到传代标准。传代细胞形态单一,呈长梭形。

五、服务流程:



威斯腾生物服务项目


分子生物学检测蛋白质与免疫学动物实验
实时荧光定量PCR单克隆抗体制备帕金森疾病模型
免疫共沉淀(Co-IP)多克隆抗体制备抑郁症动物模型
ELISA(酶联免疫吸附法)技术Western-blot 实验服务脊髓损伤模型
生化指标检测蛋白双向电泳实验服务脑外损伤模型
双荧光素酶报告基因检测原核蛋白表达纯化骨神经损伤模型
染色质免疫共沉淀(ChIP)真核蛋白表达纯化心肌缺血模型
GST pull DownITRAQ定量蛋白质组学心力衰竭模型
SLAC蛋白组学肺动脉高血压动物模型
高血压模型
病毒包装纯化实验课题整体外包粥样动脉硬化模型
过表达/干扰慢病毒包装纯化整体课题外包大脑中动脉阻塞模型
过表达/干扰腺病毒包装纯化细胞整体实验外包慢性之气管炎模型
逆转录病毒包装纯化动物整体实验外包过敏性哮喘模型
腺相关病毒包装纯化肺炎大鼠模型
肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片原代细胞培养肝纤维化模型
细胞因子芯片骨髓间充质干细胞培养胆结石模型
生长因子芯片脂肪干细胞培养急性胰腺炎模型
信号通路磷酸化水平检测芯片心肌成纤维细胞培养急性肾衰竭模型
BioPlex悬浮芯片软骨细胞培养体内血栓模型
生长因子芯片血管内皮细胞培养关节炎模型
炎症因子芯片神经元细胞培养I型和II型糖尿病模型
血管生成因子芯片内皮组细胞原代培养裸鼠成瘤
凋亡因子芯片基因编辑动物
趋化因子芯片电生理相关服务动物整体实验服务
HuProt TM 20K人类蛋白组芯片膜片钳实验
细胞生物学高通量测序代谢组学
细胞原代培养mRNA测序气相色谱GC/MS
MTT检测LncRNA测序液相色谱LC/MS
细胞凋亡检测全基因组测序核磁共震NMR
细胞周期检测RNA-Seq测序
细胞克隆形成实验外显子测序影像学相关实验
Transwell细胞迁移/侵袭16s扩增子测序Micro-CT
流式分选Small RNA测序小动物活体成像
CCK8/XTT检测宏基因组测序核磁共振
台盼蓝检测细胞活性单细胞测序PET-CT
药物筛选细胞学实验circleRNA测序
细胞粘附性检测甲基化测序基因编辑动物
细胞划痕实验条件性敲除小鼠/大鼠
细胞生物学整体实验全基因敲除小鼠/大鼠
细胞成管实验
病理学检测CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入基因芯片
扫描电镜基因定点突变细胞系LncRNA芯片
透射电镜单基因敲除细胞系miRNA芯片
HE染色多基因敲除细胞系mRNA芯片
免疫组化目的基因敲入细胞系甲基化芯片(限人和小鼠来源样本)
Tunel(原位末端凋亡法)检测报告基因敲入细胞系SNP芯片(限人和小鼠来源样本)
激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除细胞系
免疫荧光
Masson染色CRISPR/Cas9动物敲除/敲入科研方案设计与SCI相关服务
原位杂交基因敲除大鼠/小鼠科研文献论著翻译
荧光原位杂交基因敲入大鼠/小鼠SCI论文翻译润色服务
特殊染色(PSA、茜素红、阿尔新蓝等)临床实验/科研实验设计方案指导
行为学检测药物筛选服务项目药效学评价
水迷宫实验高通量自动药物筛选平台神经系统药物药效学评价
旷场实验细胞高内涵药物筛选平台抗肿瘤药物药效学评价
重复性刻板行为检测蛋白质组学靶标研发平台心血管系统药物药效学评价
动物跑台检测分子药理研究平台泌尿系统药物药效学评价
强迫游泳生物膜片钳药物筛选平台内分泌系统药物药效学评价
常规药物体外筛选抗炎免疫药物药效学评价

 

【本平台合作项目】

分子生物学、细胞生物学、病理染色检测、细胞敲除&敲入、模式与转基因动物、SPF动物保种、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!

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