Masson染色

Masson染色

一、Masson染色基本原理

Masson染色时胶原纤维呈蓝色(被苯胺蓝所染)肌纤维呈红色(被酸性品红和丽春红所染),这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。不同的组织和细胞成分,它们的孔隙大小是不同的。孔隙的大小,决定了组织的渗透性。如孔隙小,组织结构致密,渗透性低;孔隙宽,组织结构疏松,渗透性高。如已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料先后或混合染色,则可发现红细胞被最小分子的阴离子染料着染.肌纤维与胞质被中等大小的阴离子染料着染,而胶原纤维则被大分子的阴离子染料着染。由此说明了红细胞对阴离子染料的渗透性最小,肌纤维与胞质次之,而胶原纤维具有最大的渗透性。根据组织不同的渗透性能,选择分子大小不同的阴离子染料进行染色,便可把不同组织成分显示出来.而染料分子的大小,主要由其分子量来体现。小分子量者易于穿透结构致密、渗透性低的组织,而大分子最者则只能进入结构疏松,渗透性高的组织。一般来说,结构疏松,渗透性高的组织多选择大分子染料,而结构致密,渗透性低的组织多选择小分子染料。

三、实验主要试剂

Regaud 氏苏木精:苏木精1g,95%酒精10ml,甘油10ml,蒸馏水80ml。

将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用。

Masson丽春红酸性复红液: 丽春红0.7g,酸性复红0.3g,蒸馏水99ml,冰醋酸1ml。

0.2%冰醋酸水溶液: 冰醋酸0.2 ml,蒸馏水100 ml。

1%磷钼酸水溶液:磷钼酸1g,蒸馏水100 ml。

苯胺蓝水溶液:苯胺蓝2g,蒸馏水98 ml,冰醋酸2 ml。

1%光绿水溶液:光绿 1g,蒸馏水100 ml。

三、实验步骤

1. 石蜡切片脱蜡至水。

2. 铬化处理或去汞盐沉淀(甲醛固定的组织此步可略)。

3. 依次自来水和蒸馏水洗。

4. 用Regaud苏木精染液或Weigert苏木精液染核5-10min。

5. 充分水洗,如过染可盐酸酒精分化。

6. 蒸馏水洗。

7. 用Masson 丽春红酸性复红液5-10min。

8. 以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。

9. 1%磷钼酸水溶液分化3-5min。

10. 不经水洗,直接用苯胺蓝或光绿液染5min。

11.以0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。

12.95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固。

四、注意事项:

1.控制好染色步骤。

2.组织固定起着很重要的作用,根据不同的固定液可延长或缩短染色时间。

3.0.2%冰醋酸水溶液洗,可使色调清晰鲜艳。

4.磷钼酸水溶液对丽春红、酸性复红有分化作用,分化时镜下控制, 肌纤维和纤维素呈红色,胶原纤维呈淡粉红色即可。

五、结果提供  胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色(如光绿液染色为绿色),胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色,胞核黑蓝色。

1、完整的实验报告(包含试剂、耗材、操作步骤、病理结果);

2、原始病理照片,一般提供100倍、400倍照片各2张;

3、如果客户提供的是组织,我们提供包埋、染色片


六、样本要求

取材保持组织新鲜(组织块以小于2cm*1.5cm*0.3cm为宜),立即放入固定液(固定液用10%福尔马林液或4%多聚甲醛缓冲液,体积为组织块的10倍以上)中,避免干燥;对于有血迹的样本,可用PBS液或生理盐水冲洗后直接放入固定液中


七、服务流程

 


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