CRISPR/Cas9 基因敲除技术

CRISPR/Cas9 基因敲除技术


    CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats),即成簇规律间隔的短回文重复序列,是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制,广泛存在于众多原核生物基因中,其中II型为CRISPR/Cas免疫系统,依赖Cas9内切酶家族靶向和剪切外源DNA。

    Cas9蛋白是一种能够降解DNA分子的核酸酶(nuclease),其中含有两个酶切活性位点,每一个位点负责切割DNA双螺旋中的一条链。CRISPR在大约40%的细菌和90%的古细菌(archaea)的基因组中均有存在,它依赖crRNA (CRISPR RNA能够与tracrRNA配对,形成双链RNA结构,这种双链RNA分子能够介导Cas9核酸内切酶对与双链RNA分子互补结合的DNA序列进行切割) 和tracrRNA (trans-activating chimeric RNA, 即反式激活嵌合RNA,一种非编码RNA,能够促进 crRNA的形成,是Cas9蛋白发挥RNA介导的DNA切割作用必不可少的辅助因子)对外源DNA进行特异的识别,然后使用Cas9对外源DNA进行序列特异性地切割降解,从在细菌和古细菌细胞发挥了一种获得性免疫的作用。


    CRISPR系统间区序列的多样性和特异性已被广泛应用于基因分型、流行病学研究、分析不同人体内的细菌菌群差异、检测环境中的噬菌体等科学研究。利用CRISPR系统作用机制的独特性用于构建噬菌体抗性的工业生产菌株。CRISPR系统还可能广泛应用于:作为遗传操作的工具,用于靶向基因沉默;rRNA-Cascade复合物可用于体外DNA、RNA分子的位点特异性切割;在临床上,通过限制质粒结合转移而控制药物抗性基因在致病菌之间扩散等。最近有多项研均表明,RNA介导的Cas9系统可以被用于对人类和小鼠细胞,以及细菌或斑马鱼胚胎进行基因组改造的工作当中( Martin et al. Science.2012;Mali P,Science.2013;Cong L,Science.2013)。

与其它基因组工程技术比较,CRISPR/Cas9技术拥有以下技术优势:

    (1) 无物种限制,靶向精确性更高,可实现对靶基因多个位点同时敲除;

    (2)  使用更方便,费用更低:Cas蛋白不具特异性,只需合成一个sgRNA就能实现对基因的特异性修饰。

    (3) CRISPR/Cas9系统可避免超长、高度重复的TALENs编码载体带来的并发症。

    威斯腾生物Cas9团队成立于2011年,目前拥有利用TALEN和CRISPR/Cas9技术完成细菌基因的敲除/敲入、细胞基因的敲除/敲入、动物个体(大小鼠、猪等模式动物)的基因敲除/敲入等先进技术手段,曾为全国各科研院所及中科院系统提供CRISPR/Cas9技术相关服务,完成40余例动物个体基因敲除。威斯腾生物战略合作平台——美国国立卫生研究院(National Institutes of Health,NIH),团队成员曾于Nature等国际一流科研杂志发表大量CRISPR/Cas9相关研究成果。威斯腾生物始终紧跟相关领域前沿技术,立志为国内所有科研人员提供最先进的技术服务以及产业化合作。

 

服务流程




本平台可制备的动物模型(部分)


疾病方法动物模型成功率操作难度耗时程度
帕金森疾病6-OHDA脑立体定位注射Rat70%~80%简单比较耗时
MPTP、IP或SC注射(急性or慢性)Mouse70%简单快速
抑郁症禁食、禁水、夹尾、冰水等慢性不可知刺激Rat80%简单非常耗时
利血平药物注射或者悬尾和强迫游泳Mouse60%简单非常耗时
脊髓损伤脊髓半切、全断、牵张、挤压、打击等Rat80%普通非常耗时
脑外损伤颅脑损伤仪打击致损Rat80%普通比较耗时
坐骨神经损伤
(周围神经损伤)
切断或者夹闭神经(手术)Rat90%简单一般
心肌缺血心脏冠状动脉左前降支结扎Rat60%~70%较难非常耗时
心力衰竭腹主动脉缩窄手术致心力衰竭Rat90%简单快速
肺动脉高压手术分流术和MCT IP或SC注射Rat80%普通一般
高血压单肾单夹肾血管或者两肾一夹型肾血管Rat80%简单快速
粥样动脉硬化高脂饮食+VD3喂养Rat/Mouse50%简单非常耗时
大脑中动脉阻塞(MCAO)线栓法制备Rat 70%普通比较耗时
慢性支气管炎烟熏Rat80%简单耗时
过敏性哮喘OVA+氢氧化铝致敏Rat/Mouse80%普通耗时
肺炎模型鲍曼不动杆菌气道滴注Rat/Mouse90%简单快速
肝炎—肝硬化—肝癌DEN诱导Rat80%简单比较耗时
肝纤维化CCL4诱导Rat80%简单耗时
胆结石模型喂养致石饲料Mouse90%简单一般
急性胰腺炎牛黄胆酸钠胰胆管注射Rat90%普通快速
急性肾衰竭顺铂尾静脉注射/肾动脉缺血Rat80%普通一般
体内血栓手术或者药物诱导Mouse60-70%普通比较耗时
关节炎模型Ⅱ型胶原+佐剂诱导Rat/Mouse90%简单一般
Ⅰ型和Ⅱ型糖尿病STZ或增加高脂饲料喂养药物诱导Rat/Mouse80%简单比较耗时
荷瘤鼠/裸鼠成瘤皮下成瘤BALB/cA-nu mice90%简单一般
更多动物模型敬请咨询

 

【本平台合作项目】

分子生物学、细胞生物学、病理染色检测、细胞敲除&敲入、模式与转基因动物、SPF动物保种、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!

【全国免费热线】:400-675-6758

【电话】 023-65316016,023-65316556

【邮箱】 china-western@163.com

【官网网址】www.cqwestern.com

【地址】 重庆市高新区二郎创业大道高科创业园D栋2楼

贵阳钢格板 重庆纸箱厂家 成都格栅板 电磁阀 重庆钢格板 重庆格栅板 昆明格栅板 电磁阀门 重庆钢格板 重庆网站推广