小鼠海马/大鼠脊髓神经元细胞

小鼠海马/大鼠脊髓神经元细胞


威斯腾生物经过10多年的发展,获得了上百种细胞株和四十余种原代细胞培养经验,并建立了庞大的细胞库及原代培养资料库。细胞平台有资深实验员、规范的SOP操作文件,万级净化细胞房,这些条件为保质保量完成每个客户的实验提供了保障。 同时,威斯腾生物结合多年原代及传代细胞培养经验,结合平台已有的技术优势,建立了完善的体外药筛实验,并引进RTCA(Real-time cellular Analysis,实时无标记细胞记录仪),在药筛过程中,全程实时记录细胞真实状况,为药筛提供最真实精准的实验数据。

无菌操作注意事项

细胞培养一定要保持工作区的无菌清洁,先用紫外灯和臭氧杀菌1h,然后通风30min,操作前需要换细胞间专用拖鞋,双手带上一次性橡胶手套并用75%乙醇消毒,穿上实验服,戴上一次性口罩和帽子,操作时不能大声说话,整个无菌操作都应该在酒精灯的周围进行。


小鼠海马神经元细胞的原代分离培养

1、培养板的包被

用0.01%的 L-多聚赖氨酸溶液包被培养板和小玻片,37℃恒温孵育 4h 或常温过夜。 

吸弃 L-多聚赖氨酸溶液,灭菌去离子水漂洗培养孔及小玻片,晾干备用。 

2、小鼠海马神经元细胞的分离及培养 

(1)75%(体积分数)酒精消毒新生24h内的健康C57小鼠,在无菌条件下脱颈处死,剪开头皮及颅骨,取出脑组织,置于盛冷的pH7.2,无钙、镁的D-Hank's液的平皿中(下置冰袋)。

(2)无菌分离海马组织。保持脑组织背面朝上,在镜下小心翻开大脑皮质,暴露海马,用眼科剪或尖镊分离海马周围组织,取出放入盛有D-Hank's液的平皿中。

(3)用虹膜剪将组织剪切成1mm3左右的组织块,0.125%胰蛋白酶消化,37℃作用 20min,期间振摇 2~3 次。

(4)弃去上清液,加入完全接种液终止消化,漂洗2次。巴斯德吸管轻轻吹打 20次,制成细胞悬液,静置 2min。

(5)悬液收集于新的离心管,离心(1000rpm,10 min,4℃),弃去上清液。加入完全培养液重悬,200 目不锈钢网过滤。

(6)将滤液进行台盼蓝拒染试验,血细胞计数板镜下计数。以 8.0 ×104至 1.0 ×105/mL的密度将细胞以400µL/孔接种到预先用L-多聚赖氨酸包被的24孔培养板或 100µL/孔接种 96 孔培养板。

(7)置 37℃、5%CO2培养箱培养 4-6h,全量更换为无血清培养液。

(8)体外培养第3d,加入Ara-C-工作液,以抑制非神经细胞过度增殖,作用 24 h后吸出。

(9)此后每 3d半量换液1次 , 体外培养第 7~21d的细胞用于实验。


大鼠脊髓神经元细胞的分离及培养

1、培养板的包被

(1)将盖玻片裁成 0.5cm×0.5cm 大小,洗洁精浸洗、烘干。

(2)经 5%盐酸浸泡30min,自来水冲洗20min,三蒸水冲洗,浸泡过夜并烘干;移入 95%酒精浸泡保存。用前酒精灯烤干,放入 24 孔细胞培养板。

(3)用 0.01%的 L-多聚赖氨酸溶液包被培养皿和小玻片,37℃恒温孵育 4h 或常温过夜。

吸弃 L-多聚赖氨酸溶液,灭菌去离子水漂洗培养孔及小玻片,晾干备用。

2、大鼠脊髓神经元细胞的分离及培养

 (1) 75%(体积分数)酒精消毒新生 24h 内的健康SD大鼠,在无菌条件下断头,分离并切取脊髓,置于盛冷的pH7.2,无钙、镁的D-Hank's液的平皿中(下置冰袋)。

(2) 无菌条件下仔细剥离脊膜及血管。

(3) 用虹膜剪将组织剪切成 1mm3左右的组织块,0.125%胰蛋白酶消化,37℃作用 10min,期间振摇 2~3 次。

(4)巴斯德吸管轻轻吹打 20次,静置 5min,将细胞上清移入新的无菌离心管,加入完全接种液终止消化。剩余组织按照上述步骤继续消化,重复2-3次,制成细胞悬液。

(5)将新的离心管中细胞悬液,离心(1000r/min,10 min,4℃),弃去上清液。加入完全培养液重悬,200 目不锈钢网过滤。

(6)将滤液进行台盼蓝拒染试验,血细胞计数板镜下计数。以 8.0 ×104至 1.0 ×105/mL的密度将细胞以 400µl/孔接种到预先用L-多聚赖氨酸包被的24 孔培养板

(7)置 37℃、5%CO2培养箱培养 4~6h,全量更换为无血清培养液。

(8)体外培养第 3天,加入Ara-C 工作液,以抑制非神经细胞过度增殖,作用 24 h后吸出。

(9) 此后每 3d半量换液1次 , 体外培养第 7~21天的细胞用于实验。


威斯腾实验服务流程


威斯腾生物服务项目

细胞生物学检测高通量测序代谢组学
细胞原代培养mRNA测序气相色谱GC/MS
MTT检测LncRNA测序液相色谱LC/MS
细胞凋亡检测全基因组测序核磁共震NMR
细胞周期检测RNA-Seq测序
细胞克隆形成实验外显子测序影像学相关实验
Transwell细胞迁移/侵袭16s扩增子测序Micro-CT
流式分选Small RNA测序小动物活体成像
CCK8/XTT检测宏基因组测序核磁共振
台盼蓝检测细胞活性单细胞测序PET-CT
药物筛选细胞学实验circleRNA测序
细胞粘附性检测甲基化测序基因编辑动物
细胞划痕实验条件性敲除小鼠/大鼠
细胞生物学整体实验全基因敲除小鼠/大鼠
细胞成管实验
病理检测CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入基因芯片
扫描电镜基因定点突变细胞系LncRNA芯片
透射电镜单基因敲除细胞系miRNA芯片
HE染色多基因敲除细胞系mRNA芯片
免疫组化目的基因敲入细胞系甲基化芯片(限人和小鼠来源样本)
Tunel(原位末端凋亡法)检测报告基因敲入细胞系SNP芯片(限人和小鼠来源样本)
激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除细胞系
免疫荧光
Masson染色CRISPR/Cas9动物敲除/敲入科研设计指导&文章评估/润色
原位杂交基因敲除大鼠/小鼠科研文献论著翻译
荧光原位杂交基因敲入大鼠/小鼠论文翻译润色服务
特殊染色(PSA、茜素红、阿尔新蓝等)临床实验/科研实验设计方案指导
行为学检测药物筛选服务项目药效学评价
旷场实验高通量自动药物筛选平台抗肿瘤药物药效学评价
重复性刻板行为检测细胞高内涵药物筛选平台心血管系统药物药效学评价
动物跑台检测蛋白质组学靶标研发平台泌尿系统药物药效学评价
强迫游泳分子药理研究平台内分泌系统药物药效学评价
生物膜片钳药物筛选平台抗炎免疫药物药效学评价
常规药物体外筛选

【本平台合作项目】
分子生物学、细胞生物学、基因敲出/入、模式动物、SPF动物保种、病理学检测、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务! 
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