蛋白质谱分析

蛋白质谱分析



蛋白质经过蛋白酶的酶切消化后成肽段混合物,在质谱仪中肽段混合物电离形成带电离子,质谱分析器的电场、磁场将具有特定质量与电荷比值(即质荷比,M/Z)的肽段离子分离开来,经过检测器收集分离的离子,确定每个离子的M/Z值。经过质量分析器可分析出每个肽段的M/Z,得到蛋白质所有肽段的M/Z图谱,即蛋白质的一级质谱峰图。

通过实际谱图和理论上蛋白质经过蛋白酶消化后产生的一级质谱峰图和二级质谱峰图进行的比对,进行蛋白鉴定。




设备仪器:

美国安捷伦公司Agilent (xct-6330) 型号的液相色谱仪,MS为美国热电公司的TSQ型号质谱仪;质谱仪采用ESI(电喷雾电离)离子源,MS/MS 串连四极杆分析器。可在线检测极性有机化合物、核酸、多肽、小分子蛋白质及其化学修饰产品的实际分子量,并对送检样品进行分子量鉴定,纯度及修饰效果分析。

质量范围M/Z 10~2,000  分辨率R=2M


设备应用:

芯片/质谱 (HPLC-Chip/MS) ——显著提高了纳流液-质联用分析结果的灵敏度,可靠性和分析速度 安捷伦推出了世界第一台的基于微流控技术的纳流液相色谱芯片-质谱平台。 这项技术将主要用于蛋白质组学和药物分析方面。其核心是采用可重复使用的聚合物液相色谱芯片取代传统的液相色谱柱。这个平台将多维色谱集成在一块芯片上,采用插拔式设计,操作简单与标准液相色谱/质谱联用仪相比, 它的其灵敏度提高了3,500倍。尽管芯片的体积很小,但是可以容纳最长20 厘米的有C18填料的色谱柱。液相色谱/芯片作为一个模块与安捷伦的所有6000系列液-质联用仪完全兼容。 液相色谱-芯片技术主要应用蛋白质组学研究和药物标靶研究等领域。有关的应用发表在许多国际知名的杂志上,如Analytical Chemistry; Electrophoresis, PNS上液相色谱芯片产品主要包括七种类型的芯片涵盖大分子和小分子的应用:
* 酶解蛋白质鉴定芯片

* 酶解蛋白质鉴定芯片

* 寡聚糖的芯片

* 直接进样芯片
* 小分子芯片

* 质谱校正和诊断芯片

* 全蛋白质分析芯片


测试范围:
多肽、蛋白质的电喷雾质谱分子量测定以及天然产物分子、生物大分子、有机分子的质谱测试和研究


送检样品要求:

样品应尽量不含盐份、离子表面活性剂、去垢剂及一些难挥发性盐。样品送检量、溶解方式以及未知可否做质谱检测的样品可与我们的工作人员联系以便提高检测效率。(送样单请附带检测样品的品名及精确计算分子量)


送样须知:

A:样品量:50pmol干粉或1ug/uL以上(一般测试)、100pmol干粉或1ug/uL以上(MALDI串联质谱分析)、100ug干粉以上(二硫键分析、糖基化分析,磷酸化分析,其他修饰分析)、10ug干粉以上(SDS-PAGE或IEF);

B:盐含量:挥发性无机盐,<20mM,请勿使用PBS、SDS和尿素等质谱干扰物质;

C:考马斯亮蓝染色样品可全部接收,银染过程中不得使用glutaraldehyde作为固定剂;

D:请告知样品是否有修饰,并请注明修饰方式。


主要应用 :
* 蛋白质组学研究 

* 寡聚糖和糖蛋白的研究 

* 小分子化合物分析

* 药物发现和研发 

* 食品和环境样品分析


威斯腾实验服务流程





威斯腾生物服务项目


分子生物学检测蛋白质与免疫学动物实验
实时荧光定量PCR单克隆抗体制备帕金森疾病模型
免疫共沉淀(Co-IP多克隆抗体制备抑郁症动物模型
ELISA(酶联免疫吸附法)技术Western-blot 实验服务脊髓损伤模型
生化指标检测蛋白双向电泳实验服务脑外损伤模型
双荧光素酶报告基因检测原核蛋白表达纯化骨神经损伤模型
染色质免疫共沉淀(ChIP真核蛋白表达纯化心肌缺血模型
GST pull DownITRAQ定量蛋白质组学心力衰竭模型
SLAC蛋白组学肺动脉高血压动物模型
高血压模型
病毒包装实验课题整体外包粥样动脉硬化模型
过表达/干扰慢病毒包装纯化整体课题外包大脑中动脉阻塞模型
过表达/干扰腺病毒包装纯化细胞整体实验外包慢性之气管炎模型
逆转录病毒包装纯化动物整体实验外包过敏性哮喘模型
腺相关病毒包装纯化肺炎大鼠模型
肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片原代细胞培养肝纤维化模型
细胞因子芯片骨髓间充质干细胞培养胆结石模型