分子克隆与质粒载体构建

分子克隆和质粒载体构建


一、分子克隆的相关载体

DNA片段的克隆需要合适的载体,载体或是质粒,或是噬菌体,或是病毒,通常大多经过人工改造。作为载体必须具备两条件:一是该载体在细胞内必须能自主复制,即必须具备复制原点;二是该载体必须具备适合的酶切位点,且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条,保证了载体的可繁殖性和可利用性。为了便于获得阳隆克隆,载体上常有筛选标记,如对抗菌素的抗性,某些基因产物的显色反应等。

二、服务要求

1、请以Email等形式告知我们服务的主要目的及具体要求。

2、提供外源DNA的来源及背景资料。DNA来源包括:PCR扩增产物;RTPCR扩增产物;从其它质粒上酶切得到的DNA片段等。

3、提供DNA片段的电泳照片,并请标明Marker有浓度。

4、提供载体来源与背景资料。

5、注明克隆使用的酶切位点以及是否需要平端连接等。

 

三、相关材料说明

1、对于实验材料中涉及病原体等危险材料不接受。

2、实验中涉及的碱基序列请以EMAIL的形式发到我中心。

3、实验中的使用载体要尽量提供背景资料:(质粒大小,抗性,拷贝数,多克隆位点等)如果是商品化载体,请您提供生产厂家及标准名称;如果所提供载体是您自己构建的请注明大体结构情况。

4、我中心可以提供常用的如(氨苄青霉素,氯霉素,卡那霉素)以外的抗生素需您提供。

5、您自己提供的引物如果为干品,请您标注具体的OD数,如果是液体态,请您标明浓度。

6、可以用甘油菌和穿刺菌形式邮寄菌体。(最好同时提供相应的质粒);如果提供质粒,则质粒的量最好在4ug以上;如果提供的是PCR产物,则PCR产物量最好在5u以上(最好附上电泳图)

7、用于提取RNA/DNA的材料要新鲜。采样时应首先在液氮中速冻,保存在-80度的冰箱中,使用干冰运输。

 

四、结果提供

1、相关的实验说明和相关的酶切图片。

2、测序的结果。

3、构建好的载体和菌液各一份。

4、如有鉴定的客户提供PCR鉴定图片。

 

五、实验完成时间:

30个工作日


六、威斯腾服务流程:



【本平台合作项目】

分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIPCO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!

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