滑膜细胞原代培养

滑膜细胞原代培养

一、细胞操作方法

1、将切下的组织在手术台上请护士将标本放入低温生理盐水中(可不要动它),在手术完成时将标本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中带回实验室;

2、在超净台中将标本放入培养皿中,加入α-MEM洗涤;

3、获得组织切开,仔细辨认于关节反折处及增生的白色光滑的滑膜组织,附于关节软骨面的增生的血管翳也为滑膜组织(可作另一管消化),仔细剔除脂肪组织,用α-MEM洗二次(以去除红细胞),放在小青瓶中用解剖剪锐性切碎

4、用双倍获得组织的体积含有4mg/mlⅠ型胶原酶的α-MEM消化37℃孵育120分钟(在此期间震动混匀数次);

530分钟后收集第一管细胞:细胞悬液经70μm细胞滤网过滤,用1500-2000转离心6分钟,上清为Ⅰ型胶原酶加入未过滤网的组织,继续用于消化;

6、离心管底细胞用α-MEM离心洗涤2次,每次用α-MEM重悬浮后用1500-2000转,离心6分钟,最后一次用记数板观察到有细胞。细胞最终悬浮于含有10%胎牛血清的α-MEM中,接种到培养瓶中培养。

760钟后收集第二管细胞:细胞悬液经70μm细胞滤网过滤,用1500-2000转离心6分钟;用α-MEM2次,每次用α-MEM重悬浮后用1500-2000转离心6分钟,最后一次用记数板观察细胞并计数。细胞最终悬浮于α-MEM含有10%胎牛血清中,接种到培养瓶中培养。

8、必要时可做第三管细胞收集;并立即作原代滑膜细胞培养。

9、每2-3天换液一次。

二、无菌操作注意事项

细胞培养一定要保持工作区的无菌清洁,先用紫外灯和臭氧杀菌1h,然后通风30min,操作前需要换细胞间专用拖鞋,双手带上一次性橡胶手套并用75%乙醇消毒,穿上实验服,戴上一次性口罩和帽子,整个无菌操作都应该在酒精灯的周围进行。

三、服务流程:



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