滑膜细胞原代培养

滑膜细胞原代培养

一、细胞操作方法

1、将切下的组织在手术台上请护士将标本放入低温生理盐水中(可不要动它),在手术完成时将标本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中带回实验室;

2、在超净台中将标本放入培养皿中,加入α-MEM洗涤;

3、获得组织切开,仔细辨认于关节反折处及增生的白色光滑的滑膜组织,附于关节软骨面的增生的血管翳也为滑膜组织(可作另一管消化),仔细剔除脂肪组织,用α-MEM洗二次(以去除红细胞),放在小青瓶中用解剖剪锐性切碎

4、用双倍获得组织的体积含有4mg/mlⅠ型胶原酶的α-MEM消化37℃孵育120分钟(在此期间震动混匀数次);

530分钟后收集第一管细胞:细胞悬液经70μm细胞滤网过滤,用1500-2000转离心6分钟,上清为Ⅰ型胶原酶加入未过滤网的组织,继续用于消化;

6、离心管底细胞用α-MEM离心洗涤2次,每次用α-MEM重悬浮后用1500-2000转,离心6分钟,最后一次用记数板观察到有细胞。细胞最终悬浮于含有10%胎牛血清的α-MEM中,接种到培养瓶中培养。

760钟后收集第二管细胞:细胞悬液经70μm细胞滤网过滤,用1500-2000转离心6分钟;用α-MEM2次,每次用α-MEM重悬浮后用1500-2000转离心6分钟,最后一次用记数板观察细胞并计数。细胞最终悬浮于α-MEM含有10%胎牛血清中,接种到培养瓶中培养。

8、必要时可做第三管细胞收集;并立即作原代滑膜细胞培养。

9、每2-3天换液一次。

二、无菌操作注意事项

细胞培养一定要保持工作区的无菌清洁,先用紫外灯和臭氧杀菌1h,然后通风30min,操作前需要换细胞间专用拖鞋,双手带上一次性橡胶手套并用75%乙醇消毒,穿上实验服,戴上一次性口罩和帽子,整个无菌操作都应该在酒精灯的周围进行。

三、服务流程:



威斯腾生物服务项目


分子生物学类蛋白质与免疫学动物实验
实时荧光定量PCR单克隆抗体制备帕金森疾病模型
免疫共沉淀(Co-IP)多克隆抗体制备抑郁症动物模型
ELISA(酶联免疫吸附法)技术Western-blot 实验服务脊髓损伤模型
生化指标检测蛋白双向电泳实验服务脑外损伤模型
双荧光素酶报告基因检测原核蛋白表达纯化骨神经损伤模型
染色质免疫共沉淀(ChIP)真核蛋白表达纯化心肌缺血模型
GST pull DownITRAQ定量蛋白质组学心力衰竭模型
SLAC蛋白组学肺动脉高血压动物模型
高血压模型
病毒类实验课题整体外包粥样动脉硬化模型
过表达/干扰慢病毒包装纯化整体课题外包大脑中动脉阻塞模型
过表达/干扰腺病毒包装纯化细胞整体实验外包慢性之气管炎模型
逆转录病毒包装纯化动物整体实验外包过敏性哮喘模型
腺相关病毒包装纯化肺炎大鼠模型
肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片原代细胞培养肝纤维化模型
细胞因子芯片骨髓间充质干细胞培养胆结石模型
生长因子芯片脂肪干细胞培养急性胰腺炎模型
信号通路磷酸化水平检测芯片心肌成纤维细胞培养急性肾衰竭模型
BioPlex悬浮芯片软骨细胞培养体内血栓模型
生长因子芯片血管内皮细胞培养关节炎模型
炎症因子芯片神经元细胞培养I型和II型糖尿病模型
血管生成因子芯片内皮组细胞原代培养裸鼠成瘤
凋亡因子芯片基因编辑动物
趋化因子芯片电生理相关服务动物整体实验服务
HuProt TM 20K人类蛋白组芯片膜片钳实验
细胞生物学高通量测序代谢组学
细胞原代培养mRNA测序气相色谱GC/MS
MTT检测LncRNA测序液相色谱LC/MS
细胞凋亡检测全基因组测序核磁共震NMR
细胞周期检测RNA-Seq测序
细胞克隆形成实验外显子测序影像学相关实验
Transwell细胞迁移/侵袭16s扩增子测序Micro-CT
流式分选Small RNA测序小动物活体成像
CCK8/XTT检测宏基因组测序核磁共振
台盼蓝检测细胞活性单细胞测序PET-CT
药物筛选细胞学实验circleRNA测序
细胞粘附性检测甲基化测序基因编辑动物
细胞划痕实验条件性敲除小鼠/大鼠
细胞生物学整体实验全基因敲除小鼠/大鼠
细胞成管实验
病理类CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入基因芯片
扫描电镜基因定点突变细胞系LncRNA芯片
透射电镜单基因敲除细胞系miRNA芯片
HE染色多基因敲除细胞系mRNA芯片
免疫组化目的基因敲入细胞系甲基化芯片(限人和小鼠来源样本)
Tunel(原位末端凋亡法)检测报告基因敲入细胞系SNP芯片(限人和小鼠来源样本)
激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除细胞系
免疫荧光
Masson染色CRISPR/Cas9动物敲除/敲入科研方案设计与SCI相关服务
原位杂交基因敲除大鼠/小鼠科研文献论著翻译
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【本平台合作项目】

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