透射电镜

         透射电镜实验技术

 

一、透射电子显微镜结构和成像原理


透射电子显微镜结构包括两大部分:主体部分为照明系统、成像系统和观察照相室;辅助部分为真空系统和电气系统。

二、透射电镜的应用

透射电子显微镜在材料科学、生物学上应用较多。由于电子易散射或被物体吸收,故穿透力低,样品的密度、厚度等都会影响到最后的成像质量,必须制备更薄的超薄切片,通常为50100nm。所以用透射电子显微镜观察时的样品需要处理得很薄。

常用的方法:超薄切片法、冷冻超薄切片法、冷冻蚀刻法、冷冻断裂法等。对于液体样品,通常是挂预处理过的铜网上进行观察。

三、实验材料

PHILIPS TECNAI-10透射电子显微镜,2.5%戊二醛,细胞培养液(含10%血清),胰酶(使用时浓度为0.1%,含0.02%EDTA,制备时即取100mg胰酶和20mgEDTA溶于100mLPBS溶液,并在无菌操作台上用一次性过滤器过滤)、PBS、6孔板、离心管等细胞培养常用物品。

四、透射电镜样本制备实验步骤

A.细胞处理步骤

用6孔板或培养瓶培养细胞,待细胞生长达到60%-70%,吸出旧培养基,根据实验需要加药或外界刺激处理,最后用胰酶消化并收集细胞,1000r/min离心5min,弃上清,加PBS混匀,并转移1.5mlEP管中,1000r/min离心10min,轻轻吸去PBS,加1ml2.5%戊二醛,此时不要混匀吹打,使细胞成团聚集,上下倒置细胞不散开为最好,4℃保存。

样品送检,包埋,上机观察拍照。

胰酶消化步骤:先吸除培养瓶中旧培养基,用PBS洗2次,加入胰酶消化液约0.5ml,晃动使消化液铺均匀,置37度培养箱约2-5分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入1-2ml完全培养基后,轻轻吹打,收集细胞至离心管,1000转/min离心5min,弃上清,即得到细胞沉淀。

B.微生物处理步骤

收集微生物沉淀,加PBS混匀,并转移1.5mlEP管中,1000r/min离心20min(时间较细胞处理的时间长),轻轻吸去PBS,加1ml2.5%戊二醛,此时不要混匀吹打,使成团聚集,上下倒置细胞不散开为最好,4℃保存。

样品送检,包埋,上机观察拍照。

C.组织块处理步骤

取材。将组织切成1mm左右的方块贮存于1.5mlEP管中。加1ml2.5%戊二醛, 4℃保存。

样品送检,包埋,上机观察拍照。

五、服务流程:

 


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