引物合成

         威斯腾生物引物合成服务

一、威斯腾服务产品介绍:

单链DNA (寡核苷酸)短片段的引物在生物技术领域如PCR 扩增、DNA 测序等实验中,具有非常重要的作用。威斯腾生物技术服务中心拥有多年的引物合成经验,熟练的专业技术人员,采用国际先进的DNA 合成仪,能为客户精确合成各种类型的引物。


严格的质量控制:为了保证引物的质量和通量,金斯瑞配备了多台先进的DNA合成仪,可以高质高效地为客户精确合成各种类型的引物;金斯瑞也通过自动处理订单,有效地避免了人为失误,并提供RPCPAGEHPLC等多种纯化方式,所有产品经过严格的质量抽检后才发货给客户。


30
多种引物标记服务:对引物进行荧光标记是分子生物学常用的研究手段,金斯瑞可以为客户提供5' 3' FAM5' HEX30多种引物荧光标记服务。


引物合成周期短:几乎所有引物的合成交货时间不超过5个工作日。 


合成能力:长度可达110 base


发货时间:从安排订单之日起,4天内发货。


纯化方式:RPC纯化、PAGE纯化、HPLC纯化。


合成报告:随产品提供OD值、nmol数、分子量、Tm值等数据报告。



二、引物纯化:

C18柱脱盐

又称为简易反相柱,对DNA有特异性吸附,可被有机溶液洗脱,但不会被水洗脱,因此能有效地去除盐分,但不能有效去除比目的片段短的小片段。该方法一般不会对普通PCR反应产生影响。对于需要用于测序、克隆的引物不能使用这个级别。

RPC纯化

RPC纯化是通过反相净化滤芯 (Reverse Phase Cartridge) 对引物进行纯化,纯化原理与反相HPLC纯化一样。与反相HPLC比较,RPC是一种有效并且更加经济的纯化方式。反相净化滤芯通常包含一种疏水基质如 C18的硅胶,能够很好的吸附DNA,并且可以用水轻松地将切割下来的保护基团和短的引物片段从反相柱上洗掉。RPC纯化的引物可以应用于DNA测序、 PCR及基因合成等。

PAGE纯化

PAGE纯化法是使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,对引物DNA进行分离,然后从凝胶中回收目的DNAPAGE纯化法也是一种非常有效的DNA纯化方法,纯化后的DNA纯度大于90%,对长链Oligo DNA (大于50 mer)的纯化特别有效。

HPLC纯化

HPLC纯化是使用高效液相色谱的原理,对引物DNA进行纯化。该方法用于分离纯化或分析时能达到很高的纯度和灵敏度。在引物DNA的分析和纯化中,常用的有离子交换(ion-exchangeHPLC和反相(reverse-phaseHPLCreverse phase HPLC:纯度大于90%ion exchange HPLC:纯度大于95%,可以有效的去除N-1短片段。HPLC纯化主要用于短链和修饰引物的纯化。该法的缺点是成本较高,批量生产效率不高。




三、修饰引物:

基团修饰:硫代修饰,稀有碱基(dIdU),修饰基团(氨基、生物素、地高辛、巯基、磷酸化)

荧光标记:FAMTAMRAFITCTETHEXCy3Cy5等标记。

双标记荧光探针:探针5' 端标记荧光基团,3' 端标记淬灭基团,采用组合纯化方式,保证了探针的质量。

分子信标:呈发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针,两端的核酸序列互补配对,一端标记荧光基团,另一端标记淬灭基团,自由状态下两个基团靠近,荧光淬灭;与靶序列结合,分子信标构型改变,恢复荧光。


四、实验周期

      3-5个工作日


五、威斯腾服务流程:



【本平台合作项目】

分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIPCO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!

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