总RNA提取


RNA提取技术服务

实验介绍 

TRIZOL试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。

RNA提取(Trizol提取)实验步骤



RNA提取


在收集到生物材料之后,最好能即刻进行RNA 制备工作。若需暂时储存,则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80冷冻柜。在制备RNA 时,将存于冷冻柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破细胞,不可以先行解冻,以避免RNase 的作用。

1. 提取组织RNA 时,每50100mg 组织用1ml Trizol 试剂对组织进行裂解;提取细胞RNA 时,先离心沉淀细胞,每5-10 106 个细胞加1ml Trizol 后,反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞;

2. 将上述组织或细胞的Trizol 裂解液转入EP 管中,在室温15~30C下放置5 分钟;

3. 在上述EP 管中,按照每1ml TRIZOL 0.2ml 氯仿的量加入氯仿,盖上EP管盖子,在手中用力震荡15 秒,在室温下(1530)放置23 分钟后, 12000g28)离心15 分钟;

4. 取上层水相置于新EP 管中,按照每1ml TRIZOL 0.5ml 异丙醇的量加入异丙醇,在室温下(1530)放置10 分钟,12000g28)离心10 分钟;

5. 弃上清, 按照每1ml TRIZOL 1ml 75%乙醇进行洗涤, 涡旋混合, 7500g28)离心5 分钟,弃上清;

6. 让沉淀的RNA 在室温下自然干燥;

7.Rnase-free water 溶解RNA 沉淀。

 

实验周期:

大约一周,根据量的多少而有所不同。


威斯腾服务流程




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