Transwell 细胞迁移

Transwell 细胞迁移实验对外服务!  hot!

一、实验介绍

细胞迁移与侵袭实验将 Transwell 小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔,将研究的细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。


二、实验步骤

1、材料准备:

可拍照显微镜,Transwell小室,孔径8μm,没包被胶的(CosterCorning公司的也较常用)Transwell迁移实验的细胞培养板24孔板。细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套,BD公司的Matrigel,无血清DMEM(1%胎牛血清)DMEM1640培养基,DMEM完全培养基,1640完全培养基(也可加到20%血清),无菌PBS,棉签,胰酶,4%多聚甲醛固定液或者甲醇,结晶紫染液(0.1%g/mlPBS结晶紫)

2、步骤和流程

2.1基质胶铺板:

BD公司的Matrigel 18(根据细胞产生mmp的量来决定)稀释,包被Transwell小室底部膜的上室面,置3730min使Matrigel聚合成凝胶。使用前进行基底膜水化。

2.2制备细胞悬液

①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿1224h,进一步去除血清的影响。但这一步并不是必须的。

②消化细胞,终止消化后离心弃去培养液,(用PBS12遍),用含BSA的无血清培养基重悬。调整细胞密度至5×105/ml

2.3接种细胞

①取细胞悬液100µl加入Transwell小室。

24孔板下室一般加入600µl20S的培养基,特别注意的是,下层培养液和小室间常会有气泡产生,一旦产生气泡,下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了,在种板的时候要特别留心,一旦出现气泡,要将小室提起,去除气泡,再将小室放进培养板。

③培养细胞:常规培养1248h(主要依癌细胞侵袭能力而定)。24h较常见,时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外,处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。

2.4结果统计

直接计数法,贴壁细胞计数,这里所谓的贴壁是指细胞穿过膜后,可以附着在膜的下室侧而不会掉到下室里面去,通过给细胞染色,可在镜下计数细胞。

取出Transwell小室,弃去孔中培养液,用无钙的PBS2遍,甲醇固定30分钟,将小室适当风干。

0.1%结晶紫染色20 min,用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞,用PBS3遍。

400倍显微镜下随即五个视野观察细胞,记数。


三、服务周期

 1-2个月


四、服务流程



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