台盼蓝检测活性

台盼蓝检测活性

一、实验介绍

正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡,这与中性红作用相反。因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。 并且操作非常简单。


二、操作步骤:

1. Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;

2. 0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=11混合液来消化培养的贴壁细胞;

3. 再加入适量Hanks液制成细胞悬液;

4. 将待染色细胞稀释至所需浓度(方法及浓度范围与细胞计数相同);

5. 0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染35min

6. 染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察;

7. 死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。活细胞不着色并保持正常形态,有光泽;

8. 计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目;

9. 统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率。

细胞活率(%=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100


三、注意事项:

1. 染色时间不能太长,否则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色,使监测结果偏低;

2. 另可结合细胞计数方法,同时进行细胞计数和活力检测。


四、服务周期

15-25个工作日


五、服务流程:



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