单克隆抗体制备


                         单克隆抗体制备技术服务

简介:

单克隆抗体(单抗)应用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫动物的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞,通过HAT筛选,ELISA抗体检测,有限稀释克隆化,选择出具有分泌抗体功能又能无限繁殖的来源于单一B细胞的杂交瘤细胞,并产生抗体,就是单克隆抗体。单抗的最大优势是它的特异性、均一性、高效性和无限供应性。在免疫学、医学、生物学等领域的基础研究和临床医学上,包括对疾病(包括癌症)的诊断、预防和治疗等方面,均显示出巨大的生命力。

实验步骤:

1. 每种抗原免疫5Balb/c小鼠
2.
选取ELISA效价较高的小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合
3.
进行2~4次克隆化及ELISA筛选,确保杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性
4.
抗体亚类鉴定
5.
至少选择2株杂交瘤细胞的冻存,并免费提供一年的保种服务

单抗制备标准流程:

时间(天)

制备步骤

说明

1

初次免疫

每种抗原免疫5Balb/c小鼠,抗原与弗氏完全佐剂

22

第二次免疫

抗原与弗氏不完全佐剂

43

第三次免疫

抗原与弗氏不完全佐剂

免疫一周后取血+ELISA检测效价

57

加强免疫

单独抗原

三天后采血(血清做阳性对照),取脾

60

细胞融合

SP2/0骨髓瘤细胞与一只小鼠(ELISA效价较高)的脾细胞融合

70-100

HAT选择杂交瘤细胞

ELISA效价检测筛选阳性细胞克隆

 

 

至少进行2~4次杂交瘤细胞的亚克隆,直至细胞上清的ELISA结果阳性

率达到100%,将完成细胞建株

115-120

亚类鉴定

对杂交瘤细胞株所分泌的抗体进行亚类测定

120

冻存细胞株

每种抗原提供2株杂交瘤细胞

121-140

制备腹水并纯化

接种细胞制备腹水、Protein A/G 纯化

150

最终提供

2株杂交瘤细胞和相应Protein A/G 纯化的单抗IgG2~5mg/

完整的技术服务报告

完整实验记录
























抗体的应用:
制备的抗体可能用于ELISAWBIHCIP等实验。

户需提供的材料及信息:

1、   客户需要提供2mg以上的纯化蛋白质,纯度≥90%(SDS-PAGE检测),若带融合标签需说明并提供筛选蛋白

2、   如为多肽,客户要提供两种偶联不同蛋白质的多肽各4mg,未偶联多肽1mg,偶联多肽纯度≥85%

结果提供:实验报告                   免疫前血清(20µl         免疫后血清(20µl

抗体上清(至少3,1ml/株)   杂交瘤细胞(3株)           抗体亚型

如需要纯化的客户增加如下结果:

纯化抗体(3株)(纯度≥90,浓度≥1mg/ml,每株5mg   免疫效价   抗体亲和力常数

 

相关说明:

 

A、免疫原可以为重组蛋白、天然蛋白、合成多肽、偶联小分子等。

B、客户需要承诺外的细胞株,每株价格为500元。

C、客户需要对承诺外的细胞株抗体进行纯化,价格为1500/5mg(单独报价为1800元)。

D、如客户需要非IgG类的其他细胞株,每株价格500元,纯化费用500/5mgCAAS法纯化)

 

【本平台合作项目】

分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIPCO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!

【全国免费热线】:400-675-6758

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