MTT检测服务
作者: 来源: 时间:2016/8/30 15:46:24 点击次数:0

MTT检测服务


活动内容:
     1、MTT检测费用:原价60元/样本,促销价30元/样本,每个样本含三个重复。
     2、试剂费由客户提供或者我们代购。

  

 
 注此活动最终解释权归威斯腾生物所有。

一、MTT原理:
MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物,是一种接受氢离子的染料,可作用于活细胞线粒体中的呼吸链,在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂,生成蓝色的formazan结晶,formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失,不能将MTT还原)。还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠(pH 4.7)的MTT溶解液中溶解,利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值,以反映出活细胞数目。也可以用DMSO来溶解。MTT粉末和溶液保存时都需要避光,用铝箔纸包好就可以。实验的时候一般关闭超净台上的日光灯来避光,觉得这样比较好。
二、MTT步骤如下:

1:接种细胞:用含10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液,以每孔
1000-10000个细胞接种到96孔板,每孔体积200ul.
2:培养细胞:同一般培养条件,培养3-5天(可根据试验目的和要求决定培养时间)。
3:呈色:培养3-5天后,每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS 配)20ul.
继续孵育4小时,终止培养,小心吸弃孔内培养上清液,对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO,振荡10分钟,使结晶物充分融解。
4:比色:选择490nm波长,在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值,记录结果,以时间为横坐标,吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
三、
客户需提供:

样本描述,相关的实验设计内容如作用时间和样本浓度等。
四、结果提供:
实验结果IC50值。

五、完成时间:
接到样本1月以内。

六、服务流程:

【本平台合作项目】
分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!
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