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成功案例
基因敲除小鼠的繁育鉴定

时间:2020-08-05 10:38:00 浏览:395次



1. Product Information

Name

C57BL/6-XXXtm1cyagen

Serial Number

KOCMP-21018-XXX

Gene

XXX

NCBI ID

18024

Strain

C57BL/6

Type

conventional knockout

2. gRNA target sequence

gRNA1 (matching forward strand ofgene): CAGCCCTTGGTTAGCAGCGCAGG

gRNA2 (matching forward strand of gene): TTCTATACTAAACGTTAGCTAGG

3. Delivery Information

 4. Genotyping Strategy

5. PCR Screening

Animals 2 and 6 were identified positive by PCR screening.

Note:

1)PCR was carried out in 25 µL volume for 35 cycles under standard conditions, with primers listed above added to each reaction.


 2) Taq DNA polymerase used was P112-01.



 3) Two controls used in PCR genotyping are:


 Ø Water control: No DNA template added.


 Ø Wildtype control: 400 ng of mouse genomic DNA.  



6. Sequencing Confirmation


Sequencing Primer for PCR product:

Sequence primer (F1): 5’-GAAGCATTATCATTTGGTGGGAAC-3’


Sequencing Results:


Positive animals

Mouse ID: 2, 6 (Deleted 4961 bp and inserted 28 bp)

7. Breeding and Genotyping strategy

8. 配种与繁殖汇总

小鼠配种与繁殖情况如下图所示。

1+/+DNA双链都含有XXX基因,即野生型小鼠;+/-为只有一条DNA链含有XXX基因,即杂合子小鼠;-/-DNA双链都不含XXX基因,即纯合子小鼠。

       (2)红色字体标记表示纯合子小鼠,蓝色字体标记表示小鼠已死亡。

      PCR鉴定

     (1)5/9,2#,6#鉴定。

     根据图一,说明:2-1、6-1用引物F1/R1进行PCR;2-2、6-2用引物F1/R2进行PCR。鉴定结果:2#,6#为杂合子。

      (2)5/19,7#~13#鉴定。

       根据图二,说明:前面是用引物F1/R1进行PCR;后面是用引物F1/R2进行PCR。鉴定结果:7#、9#、10#为纯合子;11#、12#、13#为杂合子;8#为野生小鼠。其中11#引物F1/R1条带不明显,后续重新取材鉴定。