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威斯腾公众号

CRISPR/Cas9细胞敲除/入
细胞系基因靶向操作服务

时间:2020-07-17 16:42:00 浏览:693次


基因敲除敲入技术一直是研究特定基因功能的有效工具。威斯腾生物利用最新的CRISPR/Cas系统可以有效的实现对细胞系特定基因的敲除和定点突变。


技术原理

Clustered Regularly Interspaced Short PalindromicRepeats(CRISPR)/Cas是细菌和古细菌不断进化而获得的免疫防御机制,其中II型CRISPR/Cas免疫系统依赖Cas9内切酶家族靶向和剪切外源DNA。CRISPR/Cas9系统通过小导向RNA(sgRNA)对切割区域进行识别,进而利用Cas9内切酶实现靶向区域的切割以产生DNA双链断裂。该系统灵活简单,可实现多个靶点的同时操作。目前我们采用Double Nicking技术,显著降低脱靶率。

我们利用该技术,定点敲除和修饰各种细胞系中的特定基因。对打靶细胞进行药物筛选,利用CRISPR/Cas系统获得的基因敲除细胞的剔除效率会明显高于常规的利用RNAi和shRNA介导的基因敲落。

技术特色
1. 可实现多个靶基因位点及多个基因的同时敲除
2. 最新Nickase酶/双gRNA技术,显著降低脱靶率
3. 无种属限制,适用于各种细胞系的靶向敲除
4. 服务周期短,2个月即可交付阳性细胞
服务内容
靶向目标序列gRNA的设计及载体构建
目标细胞系共转染
阳性细胞株的筛选和鉴定

应用范畴
基因功能分析:在细胞水平研究基因的功能
定点突变::建立点突变细胞,可用于药物靶点研究。
启动子功能分析:该方法建立的启动子分析系统,可有效地分析内源性启动子的强度,是一种最理想的分析系统。

服务流程



本平台可制备的动物模型(部分)


疾病 方法 动物 模型成功率 操作难度 耗时程度
帕金森疾病 6-OHDA脑立体定位注射 Rat 70%~80% 简单 比较耗时
MPTP、IP或SC注射(急性or慢性) Mouse 70% 简单 快速
抑郁症 禁食、禁水、夹尾、冰水等慢性不可知刺激 Rat 80% 简单 非常耗时
利血平药物注射或者悬尾和强迫游泳 Mouse 60% 简单 非常耗时
脊髓损伤 脊髓半切、全断、牵张、挤压、打击等 Rat 80% 普通 非常耗时
脑外损伤 颅脑损伤仪打击致损 Rat 80% 普通 比较耗时
坐骨神经损伤
(周围神经损伤)
切断或者夹闭神经(手术) Rat 90% 简单 一般
心肌缺血 心脏冠状动脉左前降支结扎 Rat 60%~70% 较难 非常耗时
心力衰竭 腹主动脉缩窄手术致心力衰竭 Rat 90% 简单 快速
肺动脉高压 手术分流术和MCT IP或SC注射 Rat 80% 普通 一般
高血压 单肾单夹肾血管或者两肾一夹型肾血管 Rat 80% 简单 快速
粥样动脉硬化 高脂饮食+VD3喂养 Rat/Mouse 50% 简单 非常耗时
大脑中动脉阻塞(MCAO) 线栓法制备 Rat 70% 普通 比较耗时
慢性支气管炎 烟熏 Rat 80% 简单 耗时
过敏性哮喘 OVA+氢氧化铝致敏 Rat/Mouse 80% 普通 耗时
肺炎模型 鲍曼不动杆菌气道滴注 Rat/Mouse 90% 简单 快速
肝炎—肝硬化—肝癌 DEN诱导 Rat 80% 简单 比较耗时
肝纤维化 CCL4诱导 Rat 80% 简单 耗时
胆结石模型 喂养致石饲料 Mouse 90% 简单 一般
急性胰腺炎 牛黄胆酸钠胰胆管注射 Rat 90% 普通 快速
急性肾衰竭 顺铂尾静脉注射/肾动脉缺血 Rat 80% 普通 一般
体内血栓 手术或者药物诱导 Mouse 60-70% 普通 比较耗时
关节炎模型 Ⅱ型胶原+佐剂诱导 Rat/Mouse 90% 简单 一般
Ⅰ型和Ⅱ型糖尿病 STZ或增加高脂饲料喂养药物诱导 Rat/Mouse 80% 简单 比较耗时
荷瘤鼠/裸鼠成瘤 皮下成瘤 BALB/cA-nu mice 90% 简单 一般
更多动物模型敬请咨询

【本平台合作项目】

分子生物学、细胞生物学、病理染色检测、细胞敲除&敲入、模式与转基因动物、SPF动物保种、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!

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