一、荧光免疫测定技术

将试剂抗原或试剂抗体用荧光素进行标记，试剂与标本中相应的抗体或抗原反应后，测定复合物中的荧光素，这种免疫技术，称为免疫荧光素技术。

二、常见荧光素

⑴FITC；⑵RB200；⑶TRITC；⑷镧系：Eu、Tb；⑸PE；⑹其它。

三、实验仪器与试剂

1、实验仪器：染色缸5个，玻片架1个，微波炉，湿盒，37℃恒温箱，锡箔纸

2、实验试剂：二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ、无水酒精、30%双氧水、柠檬酸盐缓冲液（粉末，制备时候用双蒸水定容，调PH）、PBS、BSA（粉末，用PBS溶解）、一抗（可用BSA溶解）、二抗（可用BSA溶解）、甘油、丙酮、多聚甲醛、Triton X-100(用PBS制备)

四、实验步骤

石蜡包埋切片处理方法：

1.二甲苯Ⅰ浸泡20分钟

2.二甲苯Ⅱ浸泡20分钟

3.梯度酒精（100、95、75）%脱水各5分钟

4.双蒸水冲洗浸泡1次，5分钟

5.3%双氧水浸泡，室温5-10min，或37℃10min

6.抗原修复：切片浸入0.01M柠檬酸盐缓冲液（PH6.0），微波炉加热至沸腾后断电。自然冷却至室温。

7.PBS冲洗2次，每次3分钟

8.滴加5%BSA封闭液，室温20min

9.甩去多余液体不洗

10.滴加适当稀释的一抗，超过组织边缘2mm，置于湿盒内4℃过夜或者37℃1小时或20℃2小时

11.取湿盒于37℃温箱复温，30min

12.滴加二抗，37℃温箱孵育1小时（避光操作和存放）

13.PBS冲洗3次，每次2分钟

14.甘油封片，甘油：水=1：1或甘油：PBS=9：1

15.4℃保存，最好及时激光共聚焦拍照

冰冻切片处理方法：

1.冰丙酮浸泡30s，自然晾干

2.滴加5%BSA封闭液，室温20min

3.甩去多余液体不洗

4.滴加适当稀释的一抗，超过组织边缘2mm，置于湿盒内4℃过夜或者37℃1小时或20℃2小时

5.取湿盒于37℃温箱复温，30min

6.滴加二抗，37℃温箱孵育1小时（避光操作和存放）

7.PBS冲洗3次，每次2分钟

8.甘油封片，甘油：水=1：1或甘油：PBS=9：1

9.4℃保存，最好及时激光共聚焦拍照

结果展示

服务流程

威斯腾生物服务项目

分子生物学检测	蛋白质与免疫学	动物实验
实时荧光定量PCR	单克隆抗体制备	帕金森疾病模型
免疫共沉淀（Co-IP）	多克隆抗体制备	抑郁症动物模型
ELISA（酶联免疫吸附法）技术	Western-blot 实验服务	脊髓损伤模型
生化指标检测	蛋白双向电泳实验服务	脑外损伤模型
双荧光素酶报告基因检测	原核蛋白表达纯化	骨神经损伤模型
染色质免疫共沉淀（ChIP）	真核蛋白表达纯化	心肌缺血模型
GST pull Down	ITRAQ定量蛋白质组学	心力衰竭模型
	SLAC蛋白组学	肺动脉高血压动物模型
		高血压模型
病毒包装纯化	实验课题整体外包	粥样动脉硬化模型
过表达/干扰慢病毒包装纯化	整体课题外包	大脑中动脉阻塞模型
过表达/干扰腺病毒包装纯化	细胞整体实验外包	慢性之气管炎模型
逆转录病毒包装纯化	动物整体实验外包	过敏性哮喘模型
腺相关病毒包装纯化		肺炎大鼠模型
		肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片	原代细胞培养	肝纤维化模型
细胞因子芯片	骨髓间充质干细胞培养	胆结石模型
生长因子芯片	脂肪干细胞培养	急性胰腺炎模型
信号通路磷酸化水平检测芯片	心肌成纤维细胞培养	急性肾衰竭模型
BioPlex悬浮芯片	软骨细胞培养	体内血栓模型
生长因子芯片	血管内皮细胞培养	关节炎模型
炎症因子芯片	神经元细胞培养	I型和II型糖尿病模型
血管生成因子芯片	内皮组细胞原代培养	裸鼠成瘤
凋亡因子芯片		基因编辑动物
趋化因子芯片	电生理相关服务	动物整体实验服务
HuProt TM 20K人类蛋白组芯片	膜片钳实验
细胞生物学	高通量测序	代谢组学
细胞原代培养	mRNA测序	气相色谱GC/MS
MTT检测	LncRNA测序	液相色谱LC/MS
细胞凋亡检测	全基因组测序	核磁共震NMR
细胞周期检测	RNA-Seq测序
细胞克隆形成实验	外显子测序	影像学相关实验
Transwell细胞迁移/侵袭	16s扩增子测序	Micro-CT
流式分选	Small RNA测序	小动物活体成像
CCK8/XTT检测	宏基因组测序	核磁共振
台盼蓝检测细胞活性	单细胞测序	PET-CT
药物筛选细胞学实验	circleRNA测序
细胞粘附性检测	甲基化测序	基因编辑动物
细胞划痕实验		条件性敲除小鼠/大鼠
细胞生物学整体实验		全基因敲除小鼠/大鼠
细胞成管实验
病理学检测	CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入	基因芯片
扫描电镜	基因定点突变细胞系	LncRNA芯片
透射电镜	单基因敲除细胞系	miRNA芯片
HE染色	多基因敲除细胞系	mRNA芯片
免疫组化	目的基因敲入细胞系	甲基化芯片（限人和小鼠来源样本）
Tunel（原位末端凋亡法）检测	报告基因敲入细胞系	SNP芯片（限人和小鼠来源样本）
激光共聚焦	miRNA/LncRNA敲除细胞系
免疫荧光
Masson染色	CRISPR/Cas9动物敲除/敲入
原位杂交	基因敲除大鼠/小鼠
荧光原位杂交	基因敲入大鼠/小鼠
特殊染色（PSA、茜素红、阿尔新蓝等）
行为学检测	药物筛选服务项目	药效学评价
水迷宫实验	高通量自动药物筛选平台	神经系统药物药效学评价
旷场实验	细胞高内涵药物筛选平台	抗肿瘤药物药效学评价
重复性刻板行为检测	蛋白质组学靶标研发平台	心血管系统药物药效学评价
动物跑台检测	分子药理研究平台	泌尿系统药物药效学评价
强迫游泳	生物膜片钳药物筛选平台	内分泌系统药物药效学评价
	常规药物体外筛选	抗炎免疫药物药效学评价

【本平台合作项目】

分子生物学、细胞生物学、病理染色检测、细胞敲除&敲入、模式与转基因动物、SPF动物保种、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！

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