在线客服
在线客服
服务时间:8:30~17:30
客服热线
400-675-6758
客服服务热线
关注微信

威斯腾公众号

模式与转基因动物
条件性基因敲除鼠

时间:2020-07-17 16:43:00 浏览:469次


技术原理:

CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)最新出现的一种由RNA指导Cas核酸酶对靶向基因进行特定DNA修饰的技术。CRISPR是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制。在这一系统中,crRNA(CRISPR-derived RNA)通过碱基配对与tracrRNA(trans-activating RNA)结合形成双链RNA,此tracrRNA/crRNA二元复合体指导Cas9蛋白在crRNA引导序列靶定位点剪切双链DNA达到对基因组DNA进行修饰的目的。CRISPR/Cas9系统能够对小鼠和大鼠基因组特定基因位点进行精确编辑, 目前已经成功应用于大、小鼠基因KO/KI的模型制备。


技术特点:

(1)无物种限制

(2)靶向精确性更高

(3)可实现对靶基因多个位点同时敲除

(4)基因调控方式多种多样

(5)修饰效率高,实验周期短

条件性基因敲除通常利用“Cre-LoxP”系统实现。首先把两个LoxP位点插入到目的基因的一个或几个重要外显子的两端,以制备出有两个Loxp位点的floxed小鼠。floxed小鼠在与表达Cre重组酶小鼠杂交之前,该基因正常表达;当floxed小鼠与组织特异性表达Cre酶的小鼠进行杂交后,可实现在特定的组织或细胞中敲除该基因,而在其它组织或细胞中该基因表达正常。

建系原则与流程:

1、与野生型小鼠杂交:阳性CRISPR-Pro小鼠(+/flox)与野生型小鼠(+/+)杂交,获得F1代杂合子小鼠(+/flox);

2、挑选一对F1代杂合子小鼠(+/flox)进行自交,获得F2代纯合子小鼠(flox/flox)。


报告基因(Reporter/Tag)小鼠模型

指在目的基因的位置引入报告基因(如EGFP、mRFP、mCherry、mYFP或LacZ等)或标记基因的小鼠模型,通过报告基因的表达监控目的基因启动子的转录活性、监控目的蛋白的表达定位及细胞转运。

人源化(Humanized)小鼠模型

指带有功能性的人类基因、细胞、组织或器官的小鼠模型,通常被用做人类疾病体内研究的活体替代模型。本服务内容涉及到的是指带有功能性人类基因的小鼠模型。

Rosa26位点基因敲入小鼠模型

指在Rosa26位点引入某种基因的转基因小鼠模型。传统的转基因小鼠一般通过利用质粒进行受精卵原核注射的方式来制备,通常会得到多个品系(Founders)。不同品系由于质粒在染色体上的整合位点不同、拷贝数不同,不同品系之间不容易得到一致的结果。而且由于转基因小鼠传代后,转基因的拷贝数稀释以及基因沉默等原因,同一品系的表型在传代过程中也很容易丢失,造成实验结果不能重复。现在大部分实验室都是通过定点转基因的方式来制备转基因小鼠。其中用的最多的位点是Rosa26位点。

条件性点突变小鼠模型-诱导性(Inducible)

指在诱导剂的作用下,点突变能在特定的时间点被引入特定细胞或组织中目的基因位置的动物模型。诱导前表达野生型蛋白;诱导后,突变的蛋白在全身所有特定的细胞或组织中表达。


威斯腾实验服务流程



威斯腾生物服务项目

分子生物学检测 蛋白质与免疫学 动物实验
实时荧光定量PCR 单克隆抗体制备 帕金森疾病模型
免疫共沉淀(Co-IP 多克隆抗体制备 抑郁症动物模型
ELISA(酶联免疫吸附法)技术 Western-blot 实验服务 脊髓损伤模型
生化指标检测 蛋白双向电泳实验服务 脑外损伤模型
双荧光素酶报告基因检测 原核蛋白表达纯化 骨神经损伤模型
染色质免疫共沉淀(ChIP 真核蛋白表达纯化 心肌缺血模型
GST pull Down ITRAQ定量蛋白质组学 心力衰竭模型
SLAC蛋白组学 肺动脉高血压动物模型
高血压模型
病毒包装 实验课题整体外包 粥样动脉硬化模型
过表达/干扰慢病毒包装纯化 整体课题外包 大脑中动脉阻塞模型
过表达/干扰腺病毒包装纯化 细胞整体实验外包 慢性之气管炎模型
逆转录病毒包装纯化 动物整体实验外包 过敏性哮喘模型
腺相关病毒包装纯化 肺炎大鼠模型
肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片 原代细胞培养 肝纤维化模型
细胞因子芯片 骨髓间充质干细胞培养 胆结石模型
BioPlex悬浮芯片 脂肪干细胞培养 急性胰腺炎模型
生长因子芯片 心肌成纤维细胞培养 急性肾衰竭模型
炎症因子芯片 软骨细胞培养 体内血栓模型
血管生成因子芯片 血管内皮细胞培养 关节炎模型
凋亡因子芯片 神经元细胞培养 I型和II型糖尿病模型
趋化因子芯片 内皮组细胞原代培养 裸鼠成瘤
HuProt TM 20K人类蛋白组芯片 基因编辑动物
电生理相关服务 动物整体实验服务
膜片钳实验
细胞生物学检测 高通量测序 代谢组学
细胞原代培养 mRNA测序 气相色谱GC/MS
MTT检测 LncRNA测序 液相色谱LC/MS
细胞凋亡检测 全基因组测序 核磁共震NMR
细胞周期检测 RNA-Seq测序
细胞克隆形成实验 外显子测序 影像学相关实验
Transwell细胞迁移/侵袭 16s扩增子测序 Micro-CT
流式分选 Small RNA测序 小动物活体成像
CCK8/XTT检测 宏基因组测序 核磁共振
台盼蓝检测细胞活性 单细胞测序 PET-CT
药物筛选细胞学实验 circleRNA测序
细胞粘附性检测 甲基化测序 基因编辑动物
细胞划痕实验 条件性敲除小鼠/大鼠
细胞生物学整体实验 全基因敲除小鼠/大鼠
细胞成管实验
病理检测 CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入 基因芯片
扫描电镜 基因定点突变细胞系 LncRNA芯片
透射电镜 单基因敲除细胞系 miRNA芯片
HE染色 多基因敲除细胞系 mRNA芯片
免疫组化 目的基因敲入细胞系 甲基化芯片(限人和小鼠来源样本)
Tunel(原位末端凋亡法)检测 报告基因敲入细胞系 SNP芯片(限人和小鼠来源样本)
激光共聚焦 miRNA/LncRNA敲除细胞系
免疫荧光
Masson染色 CRISPR/Cas9动物敲除/敲入
原位杂交 基因敲除大鼠/小鼠
荧光原位杂交 基因敲入大鼠/小鼠
特殊染色(PSA、茜素红、阿尔新蓝等)
行为学检测 药物筛选服务项目 药效学评价
旷场实验 高通量自动药物筛选平台 抗肿瘤药物药效学评价
重复性刻板行为检测 细胞高内涵药物筛选平台 心血管系统药物药效学评价
动物跑台检测 蛋白质组学靶标研发平台 泌尿系统药物药效学评价
强迫游泳 分子药理研究平台 内分泌系统药物药效学评价
生物膜片钳药物筛选平台 抗炎免疫药物药效学评价
常规药物体外筛选

【本平台合作项目】
分子生物学、细胞生物学、基因敲出/入、模式动物、SPF动物保种、病理学检测、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!
【全国免费热线】400-675-6758
【电话】 023-65316016,023-65316556
【邮箱】 china-western@163.com
【官网网址】www.cqwestern.com
【地址】 重庆市高新区二郎创业大道高科创业园D栋2楼