科研服务 时间：2020-07-20 17:40:00 浏览：27321次
(a) MTT；
MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料。活细胞在琥珀酸脱氢酶和细胞色素c的作用下四唑环开裂，生成蓝色的甲月替结晶并沉积在细胞中，甲月替结晶的生成量仅仅与活细胞数目成正比（死细胞中的琥珀酸脱氢酶消失，不能还原MTT）。还原生成的甲月替结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺、20%的十二甲基磺酸钠（PH 4.7）或10%酸化十二甲基磺酸钠（PH 4.7）的溶液中溶解。利用酶标仪测定490nm波长处的光密度测出OD值，即反映活细胞数目。也可利用DMSO（二甲基亚砜）来溶解。用DMSO之前要尽量去掉培养液，一遍DMSO溶解甲月替颗粒，进行比色测定。
1．取96孔细胞培养板，每孔中加0.1ml含2×104～10×104靶细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养2～3小时让细胞帖壁（如果是悬浮细胞可直接进行下一步）
2．用RPMI-1640培养液2～10倍递次稀释细胞因子标准品，根据情况2～5倍递次稀释待检样品，每孔加0.1ml稀释的标准品和待检样品，每个稀释度3个重复孔。对照孔6个：3个阳性对照孔，每孔加0.1ml含大剂量细胞因子的RPMI-1640培养液，3个阴性对照孔，每孔加0.1ml RPMI-1640培养液。在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养24～48小时或预定的时间。
3．吸去培养液，用PBS洗涤一次（如为悬浮细胞，应在吸去上清液前离心培养板）。
4．每孔加0.1ml PBS和10μl MTT染液，在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养4～6小时。
5．每孔加0.1ml酸化异丙醇，也可用含10％ SDS的10mmol/L HCl代替酸化异丙醇，在振荡器上振荡混匀，让还原产物充分溶解。置酶联检测仪上测定光密度（OD）值，检测波长570nm，参考波长630nm。以OD值对样品稀释度作图，比较标准曲线和待测样品曲线即可求得待测样品中细胞因子的含量。
(b) CCK-8检测细胞增殖（活力）：
CCK-8（cell-counting kit-8）检测试剂盒是应用WST-8取代MTT被还原，WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。且WST-8相较XTT和MTS化学性状更稳定， 因此实验结果相对更加稳定。此外，WST-8相较MTT、XTT，线性范围相对宽，灵敏度更高。
当细胞增殖得越多越快，则formazan产生量越多，颜色越深；反之，当内外因造成的细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。应用酶标仪测定吸光值并进行统计学计算便可以获得细胞增殖（活性）相关数据。
(c) XTT：
化学名：2,3- bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]
-2H-tetrazolium hydroxide，作为线粒体脱氢酶的作用底物，被活细胞还原成水溶性的橙黄色产物。当XTT与电子偶合剂（例如PMS）联合应用时，其所产生的水溶性的产物的吸光度与活细胞的数量成正比。用XTT代替MTT可省去溶解还原产物结晶的步骤，XTT可以被活细胞中的代谢酶还原成黄色水溶性的代谢产物（formazan）。代谢产物在OD450处有吸收峰。优点：1、使用方便，省去了洗涤细胞；2、检测快速；3、灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度；4、重复性优于MTT。 缺点：XTT水溶液不稳定，需要低温保存或现配现用。
二、应用范围
生物活性因子的活性检测；
大规模的抗肿瘤药物筛选；
细胞增殖实验；
药物或基因导致的细胞毒性试验；
药敏试验等。
三、服务周期
15-25个工作日
四、服务流程
威斯腾生物服务项目
| 分子生物学检测 | 蛋白质与免疫学 | 动物实验 |
| 实时荧光定量PCR | 单克隆抗体制备 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗体制备 | 抑郁症动物模型 |
| ELISA（酶联免疫吸附法）技术 | Western-blot 实验服务 | 脊髓损伤模型 |
| 生化指标检测 | 蛋白双向电泳实验服务 | 脑外损伤模型 |
| 双荧光素酶报告基因检测 | 原核蛋白表达纯化 | 骨神经损伤模型 |
| 染色质免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表达纯化 | 心肌缺血模型 |
| GST pull Down | ITRAQ定量蛋白质组学 | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白组学 | 肺动脉高血压动物模型 | |
| 高血压模型 | ||
| 病毒包装纯化 | 实验课题整体外包 | 粥样动脉硬化模型 |
| 过表达/干扰慢病毒包装纯化 | 整体课题外包 | 大脑中动脉阻塞模型 |
| 过表达/干扰腺病毒包装纯化 | 细胞整体实验外包 | 慢性之气管炎模型 |
| 逆转录病毒包装纯化 | 动物整体实验外包 | 过敏性哮喘模型 |
| 腺相关病毒包装纯化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代细胞培养 | 肝纤维化模型 |
| 细胞因子芯片 | 骨髓间充质干细胞培养 | 胆结石模型 |
| 生长因子芯片 | 脂肪干细胞培养 | 急性胰腺炎模型 |
| 信号通路磷酸化水平检测芯片 | 心肌成纤维细胞培养 | 急性肾衰竭模型 |
| BioPlex悬浮芯片 | 软骨细胞培养 | 体内血栓模型 |
| 生长因子芯片 | 血管内皮细胞培养 | 关节炎模型 |
| 炎症因子芯片 | 神经元细胞培养 | I型和II型糖尿病模型 |
| 血管生成因子芯片 | 内皮组细胞原代培养 | 裸鼠成瘤 |
| 凋亡因子芯片 | 基因编辑动物 | |
| 趋化因子芯片 | 电生理相关服务 | 动物整体实验服务 |
| HuProt TM 20K人类蛋白组芯片 | 膜片钳实验 | |
| 细胞生物学 | 高通量测序 | 代谢组学 |
| 细胞原代培养 | mRNA测序 | 气相色谱GC/MS |
| MTT检测 | LncRNA测序 | 液相色谱LC/MS |
| 细胞凋亡检测 | 全基因组测序 | 核磁共震NMR |
| 细胞周期检测 | RNA-Seq测序 | |
| 细胞克隆形成实验 | 外显子测序 | 影像学相关实验 |
| Transwell细胞迁移/侵袭 | 16s扩增子测序 | Micro-CT |
| 流式分选 | Small RNA测序 | 小动物活体成像 |
| CCK8/XTT检测 | 宏基因组测序 | 核磁共振 |
| 台盼蓝检测细胞活性 | 单细胞测序 | PET-CT |
| 药物筛选细胞学实验 | circleRNA测序 | |
| 细胞粘附性检测 | 甲基化测序 | 基因编辑动物 |
| 细胞划痕实验 | 条件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞生物学整体实验 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞成管实验 | ||
| 病理学检测 | CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 扫描电镜 | 基因定点突变细胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射电镜 | 单基因敲除细胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除细胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫组化 | 目的基因敲入细胞系 | 甲基化芯片（限人和小鼠来源样本） |
| Tunel（原位末端凋亡法）检测 | 报告基因敲入细胞系 | SNP芯片（限人和小鼠来源样本） |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除细胞系 | |
| 免疫荧光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9动物敲除/敲入 |
|
| 原位杂交 | 基因敲除大鼠/小鼠 |
|
| 荧光原位杂交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | |
| 特殊染色（PSA、茜素红、阿尔新蓝等） |
|
|
| 行为学检测 | 药物筛选服务项目 | 药效学评价 |
| 水迷宫实验 | 高通量自动药物筛选平台 | 神经系统药物药效学评价 |
| 旷场实验 | 细胞高内涵药物筛选平台 | 抗肿瘤药物药效学评价 |
| 重复性刻板行为检测 | 蛋白质组学靶标研发平台 | 心血管系统药物药效学评价 |
| 动物跑台检测 | 分子药理研究平台 | 泌尿系统药物药效学评价 |
| 强迫游泳 | 生物膜片钳药物筛选平台 | 内分泌系统药物药效学评价 |
| 常规药物体外筛选 | 抗炎免疫药物药效学评价 |
【本平台合作项目】
分子生物学、细胞生物学、病理染色检测、细胞敲除&敲入、模式与转基因动物、SPF动物保种、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！
【全国免费热线】：400-675-6758
【电话】 023-65316016,023-65316556
【邮箱】 china-western@163.com
【官网网址】www.cqwestern.com
【地址】 重庆市高新区二郎创业大道高科创业园D栋2楼
QQ交谈
