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CRISPR/Cas9细胞敲除/入
CRISPR/Cas9基因敲除细胞系

时间:2020-07-21 14:14:00 浏览:12172次

CRISPR/Cas9提高了基因编辑的准确性和特异性,使以前不可能开展的实验成为可能。它的效率是传统ZFN和TALEN系统的三到四倍。而且,只需导入几个不同的引导RNA,即可删除多个基因。该技术已广泛用于构建敲除细胞系,在这类细胞系中,靶标基因可以精确删除,从而完全去除其编码的蛋白质。根据不同细胞特点选择适宜的转染方法(病毒法,化学转染法或电转法)将gRNA序列和Cas9蛋白转入细胞中,并根据不同的转染方法进行不同时长的药筛。药筛完成后进行单克隆筛选,通过靶位点扩增及测序验证筛选出成功敲除的阳性克隆,最终交付纯合子细胞株与相关数据报告。

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基因编辑细胞服务说明:

基因情况:单基因或者多基因敲除

细胞类型:贴壁细胞、悬浮细胞

服务承诺:提供单克隆细胞株

服务优势:

1. 速度:KO pool快至2周;KO单克隆纯合子,快至1.5月;

2. 敲除保证:sgRNA 3~6条,确保获得敲除株;

3. 多基因同敲:我司有两种成熟的多基因敲除实验体系,可同时/至少靶向3个基因靶点;

4. 团队专业    我司Cas9基因编辑团队目前已完成60余例细胞基因敲除案例,具备丰富的经验;

5. 种子优良    所有细胞种子均从中科院细胞库购买,代数低无污染;

6. 敲除无损    所有的敲除单克隆均通过多代次测序验证,确保敲除性状稳定不回复;

7. 质控严格    建系后连续3代细胞增殖活力评估。


基因敲除方案:
威斯腾生物根据客户需求,结合靶基因的情况进行方案定制。通常情况下,对于每个基因,我们会设计3条sgRNA,靶向切割位置靠前的外显子区域,通过细胞自身的非同源修复机制,在切割位置产生碱基的突变、插入或部分DNA序列的删除,造成错义突变、无义突变、移码突变、片段缺失,进而影响下游RNA或蛋白的功能。

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此外,威斯腾生物CRISPR/Cas9研发团队推出pWST-KOS系列质粒,可同时介导多个基因靶点的切割,实现基因的大片段删除,或同时删除多个基因!

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操作步骤:

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交付内容:

1、经测序验证的目的基因敲除细胞株及对照细胞株各2支,每支细胞量不少于1*106 Cells。

2、详尽的实验报告:包括细胞株培养信息、实验步骤;sgRNA序列及测序峰图;单克隆筛选测序验证报告。


威斯腾生物服务流程



威斯腾生物服务项目

分子生物学类蛋白质与免疫学动物实验
实时荧光定量PCR单克隆抗体制备帕金森疾病模型
免疫共沉淀(Co-IP)多克隆抗体制备抑郁症动物模型
ELISA(酶联免疫吸附法)技术Western-blot 实验服务脊髓损伤模型
生化指标检测蛋白双向电泳实验服务脑外损伤模型
双荧光素酶报告基因检测原核蛋白表达纯化骨神经损伤模型
染色质免疫共沉淀(ChIP)真核蛋白表达纯化心肌缺血模型
GST pull DownITRAQ定量蛋白质组学心力衰竭模型

SLAC蛋白组学肺动脉高血压动物模型


高血压模型
病毒类实验课题整体外包粥样动脉硬化模型
过表达/干扰慢病毒包装纯化整体课题外包大脑中动脉阻塞模型
过表达/干扰腺病毒包装纯化细胞整体实验外包慢性之气管炎模型
逆转录病毒包装纯化动物整体实验外包过敏性哮喘模型
腺相关病毒包装纯化
肺炎大鼠模型


肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片原代细胞培养肝纤维化模型
细胞因子芯片骨髓间充质干细胞培养胆结石模型
生长因子芯片脂肪干细胞培养急性胰腺炎模型
信号通路磷酸化水平检测芯片心肌成纤维细胞培养急性肾衰竭模型
BioPlex悬浮芯片软骨细胞培养体内血栓模型
生长因子芯片血管内皮细胞培养关节炎模型
炎症因子芯片神经元细胞培养I型和II型糖尿病模型
血管生成因子芯片内皮组细胞原代培养裸鼠成瘤
凋亡因子芯片
基因编辑动物
趋化因子芯片电生理相关服务动物整体实验服务
HuProt TM 20K人类蛋白组芯片膜片钳实验
细胞生物学高通量测序代谢组学
细胞原代培养mRNA测序气相色谱GC/MS
MTT检测LncRNA测序液相色谱LC/MS
细胞凋亡检测全基因组测序核磁共震NMR
细胞周期检测RNA-Seq测序
细胞克隆形成实验外显子测序影像学相关实验
Transwell细胞迁移/侵袭16s扩增子测序Micro-CT
流式分选Small RNA测序小动物活体成像
CCK8/XTT检测宏基因组测序核磁共振
台盼蓝检测细胞活性单细胞测序PET-CT
药物筛选细胞学实验circleRNA测序
细胞粘附性检测甲基化测序基因编辑动物
细胞划痕实验
条件性敲除小鼠/大鼠
细胞生物学整体实验
全基因敲除小鼠/大鼠
细胞成管实验

病理类CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入基因芯片
扫描电镜基因定点突变细胞系LncRNA芯片
透射电镜单基因敲除细胞系miRNA芯片
HE染色多基因敲除细胞系mRNA芯片
免疫组化目的基因敲入细胞系甲基化芯片(限人和小鼠来源样本)
Tunel(原位末端凋亡法)检测报告基因敲入细胞系SNP芯片(限人和小鼠来源样本)
激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除细胞系
免疫荧光

Masson染色CRISPR/Cas9动物敲除/敲入
原位杂交基因敲除大鼠/小鼠
荧光原位杂交基因敲入大鼠/小鼠
特殊染色(PSA、茜素红、阿尔新蓝等)

行为学检测药物筛选服务项目药效学评价
水迷宫实验高通量自动药物筛选平台神经系统药物药效学评价
旷场实验细胞高内涵药物筛选平台抗肿瘤药物药效学评价
重复性刻板行为检测蛋白质组学靶标研发平台心血管系统药物药效学评价
动物跑台检测分子药理研究平台泌尿系统药物药效学评价
强迫游泳生物膜片钳药物筛选平台内分泌系统药物药效学评价

常规药物体外筛选抗炎免疫药物药效学评价