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成功案例
MCAO模型在体实验相关研究

时间:2020-08-05 10:38:00 浏览:429次


一、实验动物

选择SPF SD大鼠6~8w体重250-280 g,雄性

二、实验步骤

1、动物适应性喂养

动物保持12h-12h昼夜交替,自由饮水、进食,温度23-25,适应性喂养一周后进入实验。

2、SD大鼠MCAO模型构建

参照Longa线栓法阻塞大鼠右侧大脑中动脉(MCA),建立急性局部脑缺血再灌注模型具体步骤为:大鼠称重,7%水合氯醛(0.5ml/100g)腹腔注射麻醉,颈前部备皮、消毒,然后将大鼠仰卧放置于操作台上,钝性分离右侧皮下组织及肌肉暴露出颈总动脉,眼科镊小心分离伴行于颈总动脉的迷走神经及动脉周围粘膜组织。继续向头部分离,小心剔除覆盖于动脉上方的粘膜组织,可见颈外动脉、颈内动脉与颈总动脉呈Y”字形分布,游离出独立的颈内、外动脉。颈外动脉远心端结扎(用烧烫的镊子熔断远心端便于插入栓线),近心端埋线以备结扎拴线,再用微动脉夹夹闭颈总动脉近心端和颈内动脉远心端,用显微外科剪将颈外动脉剪一小口,将栓线由颈外动脉切口处插入颈内动脉,用预先埋线结扎颈外动脉防止出血,松开微动脉夹,将栓线送入颅内,有明显的阻力感表明栓线已插入MCA,局部脑缺血模型即告成功。医用棉签清理颈部血块,缝合皮肤,酒精棉球消毒,将大鼠放回笼子。

插线成功即为脑缺血开始,将栓线轻柔退致颈外动脉处,即为再灌注开始。术后动态观察大鼠的反应。麻醉后保温致动物苏醒,肛温36.5±0.5℃



3脑室给药

实验鼠头部备皮后固定于脑立体定位仪,头顶皮肤消毒,沿中线切开头皮,剥离筋膜,标记前囟,穿刺点位于矢状缝右旁1mm,冠状缝后1.5mm,进针深度1.5mm。高速颅骨钻于右侧脑室注射部位正上方钻穿颅骨,插入微量注射器,缓慢注入药液,注射完毕后留针数分钟,缓慢移出注射器,涂抹骨蜡,缝合外皮,完成脑定位注射。



4、建模后神经功能缺损评分以及TTC染色检测脑梗死灶分布

参照Zea Longa 5级神经功能缺损评分法对大鼠进行神经功能评分。0分:无神经功能缺损;1分:轻度局灶神经功能缺陷(不能完全伸展缺血对侧前肢);2分:中度局灶神经功能缺陷(向缺血对侧转圈);3分:重度局灶神经功能缺陷(向缺血对侧倾倒);4分:不能自发行走,昏睡。

第一次评分:筛选神经功能评分在1-3分的大鼠纳入实验对象,剔除神经功能评分为0分和4分的大鼠。

第二次评分:于取材前进行评分记录各组间大鼠神经功能评分的差异。


5、WB 法检测相关蛋白指标表达


根据如下实验结果可见,与正常对照相比,A蛋白在模型组中表达增加,经过药物干预后表达降低。